解脂耶氏酵母化学转化试剂盒

（ 1） 准备一个 YPD 固体平板，将解脂耶氏酵母菌株划线于平板上生长 24 h，
对于 1-2 个转化：用接种针将菌株重新接种到一个新的平板上；对于≥3 转化反应：
将一些细胞重悬于 100 µL 无菌 H2O 中，用无菌玻璃珠将悬浮液涂于平板中。
（ 2） 对于每个要转化的菌株，准备一个装有 1 毫升无菌 H2O 的无菌反应管，
并从步骤一中刮取平板上的细胞，例如使用接种针，通过缓慢地向上和向下移液重
新悬浮细胞。
（ 3） 将悬浮液以 3000g 离心 5 min。
（ 4） 丢弃上清液，将细胞重新悬浮在 1 毫升无菌 H2O 中以清洗细胞。
（ 5） 将悬浮液以 3000g 离心 5 min。
（ 6） 丢弃上清液，用 1 毫升无菌 H2O 重新悬浮细胞以清洗细胞
（ 7） 一个转化反应应使用 5x107 个细胞（相当于 OD600为 5）。
（ 8） 将所需体积的细胞悬液转移到无菌反应管中，并在 3000g 下离心 5 min。
（ 9） 丢弃上清液，将细胞感受态用于酵母转化。
（ 10） 将 500 ng 的线性化载体和对应的敲除质粒转入到细胞感受态中。
（ 11） 将细胞感受态重悬于以下1X混合液中。

12） 将试管在 39 ℃下培养 60 min。
（ 13） 在 3000g、 5 min 条件下将细胞离心下来。
（ 14） 吸出并丢弃上清液。
（ 15） 将细胞颗粒重悬于 500 µL YPD 培养基中，在 30℃摇床培养 2h。
（ 16） 在 3000g 下离心 5 min。
（ 17） 吸出并丢弃上清液。

（ 18） 将细胞重悬于 100 µL 无菌 H2O 中，并将细胞涂布于对应的 固体平板中。